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豬血中免疫球蛋白IgG的HPLC檢測方案

免疫球蛋白:指具有抗體活性的動物蛋白。主要存在于血漿中,可溶性免疫球蛋白存在于體液中,參與體液免疫 ,也見于其他組織和一些分泌液中。人血漿內的免疫球蛋白大多數存在于丙種球蛋白(γ-球蛋白)中。免疫球蛋白可以分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五類。

人體血清免疫球蛋白IgG是初級免疫應答中最持久、最重要的抗體,它僅以單體形式存在。大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗體屬于IgG,它在抗感染中起到主力軍作用,它能夠促進單核巨噬細胞的吞噬作用(調理作用),中和細菌毒素的毒性(中和毒素)和病毒抗原結合使病毒失去感染宿主細胞的能力(中和病毒)。IgG 在機體合成的年齡要晚于IgM,在出生后第3 個月開始合成,3-5 歲接近成年人水平。它是唯一能通過胎盤的Ig,在自然被動免疫中起重要作用。此外,IgG 還具有調理吞噬和結合SPA等作用。

以下是賽智科技利用STI501高效液相色譜儀對豬血中免疫球蛋白IgG進行的HPLC檢測方案。

(本應用方案請勿轉載,侵權必究)

1、儀器與試劑

1.1儀器、設備

STI501高效液相色譜儀

蛋白柱

分析天平

PH計

容量瓶

針頭過濾器

微孔濾膜:0.45μm

1.2試劑

磷酸二氫鉀(AR)

磷酸氫二鉀(AR)

2、供試品溶液和對照品溶液的制備

對照品溶液的制備   取IgG標準品0..01g,用流動相A溶解并定容至10.0ml,搖勻,即得標準儲備液,濃度為1mg/ml;取適量該儲備液用流動相A稀釋成含IgG0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml的標準系列,臨用時配制。

供試品溶液的制備  稱取一定量的血漿蛋白粉試樣約0.1g于容量瓶中,用流動相A稀釋至25.0ml,搖勻,經0.45um微孔濾膜過濾后進樣分析。

3、色譜條件

色譜柱:蛋白柱

流動相:流動相A:PH6.5,0.05mol/l磷酸鹽緩沖液

流動相B:PH2.5,0.05mol/l甘氨酸鹽緩沖液

梯度洗脫程序見下表

波長:280nm

流速:0.4mL/min

進樣量:20ul

溫度:室溫

4、測定法

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul,注入液相色譜儀,測定,即得

5、色譜圖


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