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高效液相色譜儀分析開發中流動相調整的三個原則是由強到弱、三倍規則和粗調轉微調。

一、由強到弱：

一般先用90%的乙腈或甲醇-水或緩沖溶液進行試驗，可很快得到分離結果，然后根據出峰情況調整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。

二、三倍規則：

每減少10%的有機溶劑(乙腈或甲醇)的量，保留因子增加約3倍，此為三倍規則。調整時注意觀察各個峰的分離情況。

三、粗調轉微調：

當分離達到一定程度時，應將有機溶劑(乙腈或甲醇)10%的改變量調整為5%，并據此規則逐漸降低調整率，直至各組分的分離情況不再改變。